储存条件:
TRzol 在室温下能稳定保存 12 个月。尽管如此,为达到最佳效果,我们建议保存在 2-8℃的环境下。
重要提示:
有毒物接触皮肤或者不慎吞服,会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适,看医生并寻求苯酚和其他成分的正确治疗方案。
产品介绍:
TRzol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和裂解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心,样品分成水样层、中间层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后,RNA可以通过异丙醇沉淀来回收。
无论是人、动物、植物还是细菌,该方法对少量及大量的组织和细胞均有较好的分离效果。TRzol 试剂操作上的简单性允许同时处理多个样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRzol 抽提的总 RNA 能够避免 DNA 和蛋白的污染,可用于 RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+筛选、体外翻译、RNA 酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR,当两条引物位于单一外显子内时,建议用扩增级的 DNase I 来处理抽提的总RNA。
TRzol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA经琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7kb和15kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分),两条优势核糖体的分子量约在5 kb (28S)和2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。
注意事项:
1.从少量的组织(1~10mg)或细胞(10^2-10^4 个)中分离 RNA 样品:往组织或细胞中加入 800µl TRzol。待样品裂解后,加入氯仿并进行步骤 2 中的抽提操作。在用异丙醇沉淀 RNA 之前,加入 5~10μg 无 RNA 酶的 glycogen 作为水样层的载体。为降低其黏度在加入氯仿前用 26 号注射器抽吸两次以切断基因组 DNA。Glycogen 会留在水样层中并和 RNA 共析出。在浓缩到 4mg/ml 之前它不会抑制逆转录反应第一链的合成也不会抑制 PCR。
2.在匀浆化后和加入氯仿之前,样品可以在-60℃或者-70℃保存至少一个月。将RNA 沉淀溶于 75%的乙醇在 2-8℃至少可以保存一周,在-5—-20℃下至少可保存一年。
3.用 TRzol 抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外,室温保持在 15~30℃的条件下。
自备试剂:
氯仿、异丙醇、75%乙醇(RNase-Free water 配制)、RNase-Free water(将水加入无RNA 酶的玻璃瓶中,加入 DEPC 至 0.1% (V/V)。放置过夜并高压灭菌)。0.5% SDS溶液(RNase-Free water 配制)(可选)。
该产品仅用于科研,不能用于临床诊断!