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Human ALT ELISA Kit XY9H0447

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Human ALT ELISA Kit(96T 

检测原理: 信裕生物生产的 ELISA 试剂盒采用“夹心法”: 将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的 靶蛋白,生物素化的检测抗体与靶蛋白结合, SABC 复合物与生物素化检测抗体结合,形成免疫复合物, 加入 TMB 显色液后,若反应孔中有靶蛋白则显蓝色, 加入终止液变黄色,检测过程中游离的成分均被洗去, 用酶标仪在 450 nm 处测 OD 值,靶蛋白浓度与 OD 值 之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白 的浓度。 

试剂盒组分: (保存温度4℃)  

规格(48 T)

规格(96T

预包被酶标板

8×6条

8×12条

标准品

1支

1支

标准品/样品稀释液

10ml

15ml

生物素化检测抗体

100×)

60ul

120ul

生物素化检测抗体稀释液

6ml

12ml

SABC复合物

6ml

12ml

TMB显色液(A/B)

3ml

6ml

终止液

6ml

12ml

20×浓缩洗涤液

30ml

60ml

封板胶纸

2张

4张

产品说明书

1份

1份

标本收集与试剂准备:

1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原,无 内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可), 血清、血浆避免使用溶血,高血脂标本,标本悬 浮物应离心去除,使标本清澈透明。待测样本应 尽早检测,2-8℃保存 48 小时;更长时间须冷冻 -20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。 

2. 洗涤液配置:用蒸馏水 1:20 稀释(例:1ml 浓 缩洗涤液加入 19ml 的蒸馏水) 

3. 标准品配制:取 8 个 1.5ml 离心管,分别标注 S1,S2,S3,S4,S5,S6,S7,blank,第一管 S1 中加 入标准品/样品稀释液 900ul,第二至第八管中 分别加入标准品/样品稀释液 200ul,在第一管 中加入(2000ng/ml)标准品溶液 100ul 置于漩 涡混合器上混匀后用加样器吸出 200ul,移至第 二管,如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出 200ul 弃去,第八管为空白对照。标准曲线浓度 为: 200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 ng/ml (标准品的用量及标准曲线范围也可根据自己 需要配置)

2021113001534191123 

4. 生物素化抗体工作液配置:使用前 20 分钟,用生 物素化抗体稀释液将 100×生物素化抗体稀释 工作液,根据所需用量配置,当日使用, 剩余弃之。 

5. TMB 显色液的配置:使用前 10 分钟,将 TMB 显 色液 A 液和 B 液 1:1 混合,避光放置备用。 6. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最 高值,建议重新检测,请根据实际情况,适当倍 数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数)。 

检测程序

1. 加样:空白孔加入 50μl 标准品/样品稀释液, 其余孔各加入标准品或待测样品 50ul,将反应 板混匀后置 37℃,40 分钟。 

2. 洗板:用 洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次, 每孔加入 洗液 350μl,每次震荡/浸泡 1-2 分钟,向滤纸上印干。 

3. 空白孔加入 100ul 生物素化抗体稀释液,其余孔 各加入 的生物素化抗体工作液 100ul,混匀 后置 37℃,30 分钟。

4. 洗板:同上。 

5. 每孔加入 SABC 复合物工作液 100ul,混匀后置 37℃,20 分钟。 

6. 洗板:同上。 

7. 每孔加入提前配置好的 TMB 混合液 100ul,混匀 后置 37 ℃暗处反应 10-20 分钟(具体显色时间 根据显色结果而定)。 

8. 每孔加入 100ul 终止液,混匀,30 分钟内用酶 标仪在 450nm 处测吸光值。 

结果判断与计算: 

1. 所有 OD 值建议减除空白孔值后再进行计算,如 空白孔 OD 低于 0.1,也可以直接计算。 

2. 以标准品浓度作横坐标,OD 值作纵坐标,手工 绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品 OD 值计 算出相应含量,再乘以稀释倍数即可。 

试剂盒性能

1、 灵敏度:可测浓度小于 1.2ng/ml。 

2、 特异性:同时可检测重组或天然的人 ALT,不与人 其它细胞因子有交叉反应。 

3、 重复性:板内,板间变异系数均小于 10%。

注意事项: 

1. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测, 每次检测都应做标准曲线。 

2. 洗涤过程很关键,洗涤不充分将导致精确度误差 及 OD 值错误地升高,从冰箱中取出的浓缩洗涤 液可能有结晶,属于正常现象,37℃水浴使结晶 完全溶解后再配制洗涤液。 

3. 检测时所有试剂都要恢复到室温,板条开封后剩 余板条需封好,放回袋中 1 个月内用完。 

4. 试剂盒使用超敏 TMB 溶液,显色过深时会出现沉 淀状,属正常现象,混匀即可,不影响结果判读。 

5. 说明书以试剂盒内纸质版为准,本试剂盒仅用于 科研,不能用于临床诊断!

因厂家更改商品包装、场地、附配件等不做提前通知,且每位咨询者购买、提问时间等不同。为此,客服给到的回复仅对提问者3天内有效,其他网友仅供参考!给您带来的不便还请谅解,谢谢!

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