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SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒 XY900333TZ

SuperTOPO - Amp TA cloning kits

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SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒

产品及特点 本产品是基于 Topoisomerase 能够在几秒钟之内高速连接 DNA 片段的原理开发的无背景克隆试剂盒,它使用了本公司通过定点突变改良的 TOPO酶,连接效率比野生型更高。本试剂盒具有下列特点:
1. 高效快速,连接反应几乎在几秒钟内完成,连接率几乎达到 100%。
2. 适用于具有 A 尾巴的 DNA 片段使用。
3. 无杂带或引物二聚体的 PCR 扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。
4. 转化时只需要 37℃10 分钟复苏即可涂盘,免去冰浴、热休克和复苏步骤。
5. 零背景,无需 IPTG-X-Gal 蓝白斑筛选,故不需要 IPTG-X-Gal 培养基。
6. 本试剂盒按 10 uL 标准反应体系,有 25 次和 50 次两种规格包装供选择。

7. 提供含 Amp 和 Kan 两种抗性的载体供选择。

规格及成分

运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

自备试剂 DNA 插入片段、感受态细胞、SOC 或 LB 培养基和培养皿(含抗菌素和不含 的)

使用方法

1. PCR 扩增或酶切回收 DNA 插入片段。如果是 PCR 制备插入片段,所用 引物不能磷酸化,使用 Taq 系列的 DNA 聚合酶。

2. 电泳检测并相对定量 PCR 片段或酶切回收片段(跟 DNA marker 比较)。 并根据插入片段长度和下表确定每次连接反应需要的最佳用量:

3. 在一个干净的塑料离心管中,室温下(不要放在冰上)设置如下连接反应 体系:

4. 轻柔吹打混匀后,短暂离心,常温(20-30℃)放置 0-5 分钟。如果在冬 天室温低于 20℃,建议使用 25℃水浴或金属浴。注意:连接时间超过 5 分钟的话连接效率会降低。

5. 如果当天不转化,可以将离心管放-20℃保存。如果转化,则取 5 uL 连 接液加到 50-100 uL 刚刚融化的感受态细胞中,轻柔混匀。注意:本产 品要求感受态细胞的转化效率不得低于 5﹡10E7cfu/ug。

6. 如果片段长度小于 2 Kb,则不需要冰浴和热激,直接在离心管中加入 500 uL 不含抗菌素的 SOC 或 LB 培养基,然后取 200 uL 涂盘。也可以先 3000g 离心 2 分钟后,弃掉大部分上清,只留约 100 uL 左右,然后重 悬细菌后全部涂盘在含 Amp(对 SuperTOPO-Amp)或 Kan(对 SuperTOPO-Kan)的培养皿上,37℃过夜培养。

7. 如果片段长度长于 2 Kb,则按常规转化方式,先冰浴 2-30 分钟,然后 42℃热激 30 秒,冰上防放置 2 分钟,再在离心管中加入 500 uL 不含 抗菌素的 SOC 或 LB 培养基,37℃ 250 rpm 培养 60 分钟,然后取 200 uL 涂盘。也可以先 3000g 离心 2 分钟后,弃掉大部分上清,只留约 100 uL 左右,然后重悬细菌后全部涂盘在含 Amp(对 SuperTOPO-Amp) 或 Kan(对 SuperTOPO-Kan)的培养皿上,37℃过夜培养。

8. 用菌落 PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。

仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。

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