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2×GS Taq Master Mix XYF9201-B

基础型Taq DNA聚合酶,耐受性好,对多种模板具有良好的扩增性能,30 s/kb

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2×GS Taq Master Mix

产品组成

组分规格
2×GS Taq Master Mix5×1.0 mL

保存条件

-20℃保存 24 个月。

产品简介

本产品包含 Taq DNA Polymerase、dNTPs 以及优化的缓冲体系,浓度为 2×, 只需要添加引物、模板和 ddH2O 即可进行 PCR 扩增。本产品相对于普通 Taq PCR Mix 具有更高的产量及扩增性能,可有效扩增 5 kb 以内的 DNA 片段。体系中包含有蓝色电泳指示剂,可在扩增完成后直接上样进行电泳检测,其迁移速度在 1% TAE 琼脂糖凝胶中与 500 bp 双链 DNA 片段相近。

使用本产品扩增的产物是混合末端,纯化后可用于平末端克隆,也可用于黏末端克隆。

产品特点

操作简单:2×Mix,只需要添加引物、模板和 ddH2O 即可进行 PCR 扩增;

产量高:相对普通 Taq PCR Mix 具有更高的产量;

耐受性好:对抑制物有较好的耐受度;

适用性广:对多种模板均有良好的扩增性能。

适用范围

适用于常规 PCR 扩增。

注意事项

1. PCR Mix 应避免反复冻融,短期内多次使用可置于 4℃保存;

2. 当产物产量较低时,可通过增加延伸时间或循环数来改善;

3. 本产品不可用于细菌 16S 鉴定。

使用方法

操作示例

按下表配制 PCR 反应体系(冰上操作)

组分25 μL 体系50 μL 体系终浓度

2×GS Taq PCR Master Mix

12.5 μL 25 μL
Primer 1 (10 μM)a1.0 μL2.0 μL0.4 μM
Primer 2 (10 μM)a1.0 μL2.0 μL0.4 μM
Template DNAbAs requireAs require
ddH2OUp to 25 μLUp to 50 μL

a. 引物:扩增效果较差时,可在 0.2~0.8 μM 范围内调整引物终浓度;

b. 模板推荐量:

基因组 DNA:10~1000 ng;

质粒 DNA:0.1~30 ng;

cDNA:1~2 μL(不超过 PCR 反应总体积的 1/10)。

建议的 PCR 条件

步骤温度时间循环数
预变性94℃3 min1
变性94℃30 s30~35 cycles
退火 a55~64℃30 s
延伸72℃30 s/kb
终延伸72℃5 min1
-4℃Hold-

a. 退火温度:参考引物 Tm 值,若上下游引物 Tm 相近,建议退火温度设置为引物中 Tm 较小值+3~5℃;若上下游引物 Tm 相差较大,建议退火温度设置为引物 Tm 的中间值;亦可采用梯度退火温度,筛选最适温度。

常见问题与解决办法

Q1:扩增无产物或产物量少?

A1:

1) 模板降解或模板纯度差。电泳检测模板质量,使用高质量模板;

2) 模板浓度过低。适当增加模板用量;

3) 引物不合适。优化引物设计;

4) 退火温度不合适。设置退火温度梯度,摸索合适的退火温度;

5) 循环数过少。适当增加 5~10 个循环;

6) 延伸时间不足。复杂模板可适当增加延伸速度至 20~30 s/kb。

Q2:扩增出现非特异条带或弥散带?

A2:

1) 引物特异性差。优化引物,避免非特异性条带以及引物二聚体的扩增;

2) 引物浓度过高。降低引物浓度;

3) 模板过量或纯度差。减少模板量,使用高质量模板;

4) 退火温度过低。适当提高退火温度或使用 Touchdown PCR 程序;

5) 循环数过多。减少循环数至 25~30 cycles。

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