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2×GS Antitaq PCR Mix XY9A0578

热启动酶、高灵敏度、高产量、适用于多重PCR

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  • 2×GS Antitaq PCR Mix XY9A0578

    ¥600.00

2×GS Antitaq PCR Mix

产品组成

组分规格
2×GS Antitaq PCR Mix5×1.0 mL

保存条件

-20℃保存 24 个月。

产品简介

本产品包含抗体修饰的热启动GS Antitaq DNA聚合酶、dNTPs以及优化的缓冲体系,浓度为2×, 只需要添加引物、模板和ddH2O即可进行PCR扩增。

使用本产品扩增的PCR产物3’端带有一个突出的"A"碱基,纯化后可直接用于TA克隆。

产品特点

操作简单:2×Mix,只需要添加引物、模板和ddH2O即可进行PCR扩增;

适用范围

适用于常规PCR、热启动PCR。

注意事项

1. 请使用高质量的模板进行扩增;

2. PCR Mix应避免反复冻融,短期内多次使用可置于4℃保存。

使用方法

操作示例

按下表配制 PCR 反应体系(冰上操作)

组分25 μL 体系50 μL 体系终浓度

2×GS Antitaq PCR Mix

12.5 μL 25 μL
Primer 1 (10 μM)

0.5 μL

1.0 μL0.2 μM
Primer 2 (10 μM)

0.5 μ

1.0 μL0.2 μM
Template DNA*As requireAs require
ddH2OUp to 25 μLUp to 50 μL

*模板推荐量:

基因组DNA:10~1000 ng;

质粒DNA:1~30 ng;

cDNA:1~2 μL(不超过PCR反应总体积的1/10)。

(以上为推荐的模板使用量,实际反应条件因模板、引物等的结构不同会存在一些差异,可根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系。)

建议的 PCR 条件

步骤温度时间循环数
预变性94℃2~5 min1
变性94℃30 s30~35 cycles
退火 

50~68℃

30 s
延伸72℃1~2 kb/min
终延伸72℃5~10 min1
-4℃Hold-

常见问题与解决办法

Q1:扩增无产物或产物量少?

A1:

1) 模板降解或模板纯度差。电泳检测模板质量,使用高质量模板;

2) 模板浓度过低。适当增加模板用量;

3) 引物不合适。优化引物设计;

4) 退火温度不合适。设置退火温度梯度,摸索合适的退火温度;

5) 循环数过少。适当增加 5~10 个循环;

6) 延伸时间不足。复杂模板可适当增加延伸速度至 20~30 s/kb。

Q2:扩增出现非特异条带或弥散带?

A2:

1) 引物特异性差。优化引物,避免非特异性条带以及引物二聚体的扩增;

2) 引物浓度过高。降低引物浓度;

3) 模板过量或纯度差。减少模板量,使用高质量模板;

4) 退火温度过低。适当提高退火温度或使用 Touchdown PCR 程序;

5) 循环数过多。减少循环数至 25~30 cycles。

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