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Triumfi Mouse Tissue Direct PCR Kit XY9312S

小鼠组织直接扩增试剂盒,快速释放DNA,无需提取基因组,极大缩短了实验耗时

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Triumfi Mouse Tissue Direct PCR Kit

产品组成

组分规格
2×Mouse Tissue Direct PCR Mix5×1.0 mL
Lysis Buffer2×20 mL
Proteinase K800 μL

保存条件

Lysis Buffer 2~8℃、其余组分-20℃保存 24 个月。

产品简介

本产品是一款专为小鼠基因型快速鉴定设计的试剂盒,包含 DNA 粗提取及 PCR 扩增体系。本产品可直接利用小鼠尾巴、耳朵、脚趾等组织经 Lysis Buffer、Proteinase k 简单裂解处理后进行 PCR 扩增,无需过夜消化、酚氯仿抽提或柱式纯化等操作,使用简便,极大缩短实验耗时。产品适用于 2 kb以内目的片段的扩增以及 3 对引物以内的多重 PCR 反应。

本产品所提供的 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix 中,包含经过基因工程改造的 DNA 聚合酶、Mg2+、dNTPs 及优化的缓冲体系,具有极高的扩增效率和抑制物耐受度,使用时只需加入模板和引物,并补水至 1×即可进行 PCR 反应,使用本产品扩增的 PCR 产物 3’端带有一个突出的"A"碱基,纯化后可直接用于 TA 克隆。

产品特点

操作简便:无需提取基因组 DNA;

适用广泛:适用于多种小鼠组织的直接扩增。

适用范围

本产品适用于小鼠基因敲除分析、转基因检测、基因分型等。

注意事项

1. 为了避免样品间出现交叉污染,需准备多个取样工具,如需反复使用可在每次取样后用 2%次氯酸钠溶液或核酸清洁剂对工具表面进行清洁;

2. 建议使用新鲜采取的小鼠组织,取样量不宜过大,以避免影响扩增结果;

3. Lysis Buffer 的保存条件为 2~8℃,若低温保存可能会出现沉淀,在使用前务必充分溶解;

4. PCR Mix 应避免反复冻融,短期内多次使用可置于 4℃保存。

使用方法

操作示例

1. 基因组 DNA 的释放

1) 裂解液配制

根据需要裂解的小鼠样品数量配制组织裂解液(组织裂解液应现用现配,且充分混匀后使用),单个样品所需试剂比例如下:

组分体积

Proteinase K

4 μL 
Lysis Buffer

200 μL

2) 样品准备与裂解

推荐组织使用量:

组织类型小鼠尾尖小鼠耳朵小鼠脚趾
推荐用量1~3 mm2~5 mm21~2 个

取适量小鼠组织样品于干净的离心管中,向每个离心管中加入 200 μL 新鲜的组织裂解液,涡旋震荡后在55℃下孵育 30 min,然后 98℃加热处理 3 min。

3) 离心

将裂解产物充分震荡混匀,12,000 rpm 离心 5 min,上清液可作为模板直接用于 PCR 扩增。模板如需保存,可将上清液转移至另一个无菌离心管中,并置于-20℃保存,保存时间为 2 周。

2. PCR 扩增

将 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix 从-20℃取出后置于冰上解冻,上下颠倒混匀后按下表配制PCR反应体系(冰上操作):

组分25 μL 体系50 μL 体系终浓度
2×Mouse TissueDirect PCR Mix12.5 μL25 μL
Primer 1 (10 μM)1.0 μL2.0 μL0.4 μM
Primer 2 (10 μM)1.0 μL2.0 μL0.4 μM
裂解产物*As requireAs require
ddH2OUp to 25 μLUp to 50 μL

*加入量不应超过体系的 1/10,加入量过高时,可能会抑制 PCR 扩增。

建议的 PCR 条件

步骤温度时间循环数
预变性94℃5 min1
变性94℃30 s35~40 cycles
退火*

Tm+3~5℃

30 s
延伸72℃30 s/kb
终延伸72℃5 min1
-4℃Hold-

*退火温度:参考引物 Tm 值,建议退火温度设置为引物中 Tm 较小值+3~5℃;

常见问题与解决办法

Q1:无目的条带?

A1:

1) 裂解产物过量。选择最合适的模板用量,一般不超过体系的 1/10;

2) 取样量过大。将裂解产物稀释 10 倍后扩增,或减少取样量重新裂解;

3) 组织样品不新鲜。建议使用新鲜的组织样品;

4) 引物质量差。使用基因组 DNA 进行扩增验证引物质量,优化引物设计。

Q2:出现非特异扩增?

A2:

1) 退火温度过低、循环数过高。提高退火温度,减少循环数;

2) 模板浓度太高。减少模板用量或将模板稀释 10 倍后扩增;

3) 引物特异性差。优化引物设计。

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